COA詳解之重金屬檢查法

1.中國藥典2015版重金屬檢査方法

本法所指的重金屬系指在規(guī)定實驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。

標準鉛溶液的制備  稱取硝酸鉛0.1599g,置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。

精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每lml相當于10μg的Pb)。本液僅供當日使用。

配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。

**法

除另有規(guī)定外，取25ml納氏比色管三支，甲管中加標準鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml后，加水或各品種項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml，乙管中加入按各品種項下規(guī)定的方法制成的供試品溶液25ml，丙管中加入與乙管相同重量的供試品，加配制供試品溶液的溶劑適量使溶解，再加與甲管相同量的標準鉛溶液與醋酸鹽緩沖液（pH3.5)2ml后，用溶劑稀釋成25ml;若供試品溶液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，使之與乙管、丙管一致；再在甲、乙、丙三管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，當丙管中顯出的顏色不淺于甲管時，乙管中顯示的顏色與甲管比較，不得更深。如丙管中顯出的顏色淺于甲管，應(yīng)取樣按第二法重新檢査。

如在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液,仍不能使顏色一致時，取樣按第二法檢查。

供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢査時，可在甲、乙、丙三管中分別加入相同量的維生素C 0.5-1.0g,再照上述方法檢查。

配制供試品溶液時，如使用的鹽酸超過lml,氨試液超過2ml,或加入其他試劑進行處理者，除另有規(guī)定外，甲管溶液應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(PH3.5)2ml與水15ml,微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標準鉛溶液一定量，再用水或各品種項下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml。

第二法

除另有規(guī)定外，當需改用第二法檢査時，取各品種項下規(guī)定量的供試品，按熾灼殘渣檢查法（通則0841)進行熾灼處理，然后取遺留的殘渣；或直接取熾灼殘渣項下遺留的殘渣；如供試品為溶液，則取各品種項下規(guī)定量的溶液，蒸發(fā)至干，再按上述方法處理后取遺留的殘渣；加硝酸0.5ml,蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后（或取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5-lml，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500-600℃熾灼使完全灰化），放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯微粉紅色，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5)2ml,微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml，作為乙管；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水15ml,微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標準鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml，作為甲管；再在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。

第三法

除另有規(guī)定外，取供試品適量，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置納氏比色管中，加硫化鈉試液5滴，搖勻，與一定量的標準鉛溶液同樣處理后的顏色比較，不得更深。

2.食品添加劑中重金屬限量試驗

本標準規(guī)定了食品添加劑中重金屬的限量試驗方法。本標準適用于食品添加劑中重金屬的限量試驗。

原理  在弱酸性(pH3-4)條件下，試樣中的重金屬離子與硫化氫作用，生成棕黑色，與同法處理的鉛標準溶液比較，做限量試驗。

標準品  高純硝酸鉛[Pb（N03）2]，純度為99.99%或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書的標準物質(zhì)。

樣品處理

無機試樣的制備:無機試樣的“試樣處理”可按各產(chǎn)品質(zhì)量規(guī)格的要求進行溶解或消化等前處理。試驗應(yīng)在無元素污染的通風柜中進行。

有機試樣的制備:有機試樣的“試樣處理”除按各產(chǎn)品質(zhì)量規(guī)格的要求外，一般可按下述方法進行:

a)濕法消解:稱取5.00g試樣，置于25 ml錐形瓶中，加10 ml-15 ml硝酸浸潤試樣，放置片刻(或過夜)后，于電熱板上加熱，待反應(yīng)緩和后取下放冷，沿瓶壁加入5 ml硫酸，再繼續(xù)加熱至瓶中溶液開始變成棕色，不斷滴加硝酸(如有必要可滴加些高氯酸)至有機質(zhì)分解完全，繼續(xù)加熱至生成大量的二氧化硫白色煙霧，*后溶液應(yīng)呈無色或微黃色。冷卻后加20 ml水，煮沸除去殘余的硝酸至產(chǎn)生白煙為止。如此處理兩次，放冷。將溶液移入50 ml容量瓶中，用水洗滌錐形瓶，將洗滌液并入容量瓶中，加水定容至刻度，混勻。每10 ml溶液相當于1.0g樣品。取同樣量的硝酸、硫酸，同時做試劑空白試驗。

b)干法消解:稱取5.00g試樣，置于硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿或石英坩堝中，加入適量硫酸浸潤試樣，于電爐上小火炭化后，加2 ml硝酸和5滴硫酸，小心加熱直到白色煙霧揮盡，移入馬弗爐中，于500℃灰化完全，冷卻后取出，加2 ml鹽酸溶液(6 mol/l,)濕潤殘渣，于水浴上慢慢蒸發(fā)至干。用1滴濃鹽酸濕潤殘渣，并加10 ml水，于沸水浴上再次加熱2 min，將溶液移入50 ml容量瓶中，如有必要應(yīng)過濾，用少量水洗滌坩堝和濾器，洗濾液一并移入容量瓶中，定容后混勻，每10 ml該溶液相當于1.0 g試樣。在試樣灰化同時，另取一坩堝，同時做試劑空白試驗。

c)壓力消解罐消解法:按壓力消解罐使用說明書稱取適量試樣(**至0.001 g)于聚四氟乙烯內(nèi)罐，加硝酸2 ml?4ml浸泡過夜。再加過氧化氫2ml?3 ml(總量不能超過罐容積的1/3)。蓋好內(nèi)蓋，旋緊不銹鋼外套，放入恒溫干燥箱，120℃-140℃保持3h-4h，在箱內(nèi)自然冷卻至室溫，用滴管將消化液洗入或過濾入(視消化后試樣的鹽分而定)容量瓶中，用水少量多次洗滌罐，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混勻備用;同時作試劑空白。

測定

A管(標準管):吸取含鉛量相當于指定的重金屬限量的鉛標準使用液(不低于10 μg鉛)于50 ml納氏比色管中(如試樣經(jīng)處理，應(yīng)同時吸取與試樣液等量的試劑空白液)，加水至25 ml,混勻，加1滴酚酞指示液，用稀鹽酸(6 mol/ l,)或稀氨水((1 mol/ L)調(diào)節(jié)pH至中性(酚酞紅色剛褪去)，加入5 ml pH3.5的乙酸鹽緩沖液，混勻，備用。

B管(樣品管):取一支與A管所配套的納氏比色管，加入10 ml-20 ml(或適量)試樣液，加水至25 ml,混勻，加1滴1%酚酞指示液，用稀鹽酸(6 mol/l,)或稀氨水((1 mol/l,)調(diào)節(jié)pH至中性(酚酞紅色剛褪去)，加入5 ml pH 3.5的乙酸鹽緩沖液，混勻，備用。

C管:取一支與A、B管所配套的納氏比色管，加入與B管等量的相同的試樣液，再加入與A管等量的鉛標準使用液(10 μg/ml,)，加水至25 ml,混勻，加1滴1%酚酞指示液，用稀鹽酸(6 mol/l)或稀氨水(1 mol/l,)調(diào)節(jié)pH至中性(酚酞紅色剛褪去)，加入5 mlpH3.5的乙酸鹽緩沖液，混勻，備用。

向各管中加入10 ml新鮮制備的硫化氫飽和溶液，并加水至50 ml刻度，混勻，于暗處放置5 min后，在白色背景下觀察，B管的色度不得深于A管的色度，C管的色度應(yīng)與A管的色度相當或深于A管的色度，則可判定為樣品中重金屬含量(以鉛計)低于A管(標準管)對應(yīng)的重金屬含量(以鉛計)。

3.歐洲藥典中重金屬檢測方法

方法A

供試溶液：12ml待測水溶液，2ml pH 為3.5 的緩沖溶液，混合后加1.2ml 的硫代乙酰胺試液，立即混合。

對照溶液：10ml的標準鉛溶液（1ppm or 2ppm Pb），2mlpH為3.5的緩沖溶液，2ml的待測液，混合后加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，2mlpH為3.5的緩沖溶液，2ml的測試溶液。混合后加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合，同空白溶液比較，對照溶液顯淺棕色。    2分鐘后，供試的溶液顏色不得比對照溶液深。

方法B

用含*少量水的溶劑（例如含15％水的二氧雜環(huán)乙烷或含15％水的丙酮） 溶解規(guī)定量的供試品，制成待測液

供試溶液：12ml待測液，2mlpH為3.5的緩沖溶液，混合后加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合。

對照溶液：10ml的標準鉛溶液（1ppm or 2ppm Pb），2ml pH為3.5的緩沖溶液，2ml的待測液，混合后加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，2ml pH為3.5的緩沖溶液，2ml的測試溶液?；旌虾蠹?.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合，同空白溶液比較，對照溶液顯淺棕色。 2分鐘后，供試溶液的顏色不得比對照溶液深。

方法C

供試溶液：規(guī)定量（不超過2g）的待檢測物質(zhì)置于坩堝內(nèi)，加4ml的250g/l 的硫酸鎂溶液（稀硫酸溶解硫酸鎂），玻璃棒攪拌混合，小心加熱。如果混合物還是液體，則在水浴中蒸發(fā)使其干燥。連續(xù)加熱灼燒，灼燒溫度不超過800℃， 直到獲得白色或灰白色的殘渣。取出，冷卻后以稀硫酸潤濕殘渣，加熱蒸發(fā)后繼 續(xù)灼燒，灼燒的總時間不能超過2小時。取出，冷卻。如法制取2份殘渣，分別 加入5ml稀鹽酸，0.1ml的酚酞試液，然后滴加氨水，直到粉紅色出現(xiàn)。冷卻， 滴加冰醋酸至顏色消失，顏色消失后再多加0.5ml冰醋酸。必要時過濾，并洗滌殘渣。加水稀釋至20ml，制成待測液。取12ml該待測液，加2ml pH3.5 的緩沖 溶液，混合，加1.2ml 硫代乙酰胺試液，立即混合，制成供試溶液。

對照溶液：4ml 250g/l的硫酸鎂溶液（稀硫酸溶解硫酸鎂），規(guī)定量的標準鉛溶液（10ppmPb）。按供試溶液的制備方法，加熱灼燒，加鹽酸，加酚酞試液， 加氨水及冰醋酸等，并用水稀釋至20ml。取10ml的該溶液，加2ml待測液，2mlpH3.5的緩沖溶液，混合。加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，加2ml待測液，2ml pH3.5的緩沖溶液，混合。加1.2ml 硫代乙酰胺試液，立即混合。同空白溶液比較，對照溶液顯淺棕色。2分鐘后，供試溶液的顏色不得比對照溶液深。

方法D

供試溶液：在坩堝內(nèi)，充分的混合規(guī)定量的待檢測物質(zhì)和0.5克的氧化鎂 R1，灼燒退去紅色，直至出現(xiàn)白色和灰白色的物質(zhì)。如果灼燒30分鐘后仍有顏 色，取出冷卻，用玻璃棒混合，繼續(xù)加熱。如有必要，重復此項操作。在800℃ 加熱約1小時。分別制備兩份殘渣，各加5ml溶液（等體積的鹽酸R1和水混合）， 加0.1ml 酚酞試液，滴加氨水直至有粉紅色出現(xiàn)。冷卻，加冰醋酸直到溶液褪去顏色，再多加0.5ml冰醋酸。如有必要，過濾并洗滌殘渣。加水稀釋至20ml，制成待測液。取12ml待測液，加2mlpH3.5的緩沖溶液，混勻，加1.2ml硫代乙酰胺試液，立即混合。

對照溶液：0.5克的氧化鎂R1，加上規(guī)定量的標準鉛溶液（10ppmPb），在 100～105℃烘箱內(nèi)干燥，然后按供試溶液的制備方法灼燒，加鹽酸，加酚酞試液， 加氨水及冰醋酸等。并加水稀釋至20ml。取10ml的該溶液，加2ml待測液，2ml pH3.5的緩沖溶液，混合。加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，加2ml待測液，2ml pH3.5 的緩沖溶液，混合。加1.2ml的硫代乙酰胺試液，立即混合。同空白溶液比較，對照溶液顯淺棕色。 2分鐘后，供試溶液的顏色不得比對照溶液深。

方法E

溶解規(guī)定量的待測物質(zhì)于30ml水中，按下圖準備過濾裝置，調(diào)整注射器容量為50ml，在盤子上放置一個孔徑為3μm 過濾薄膜，過濾器上有一個前置過濾器（圖1）。

圖1 重金屬檢查裝置（標出尺寸的單位為mm）

取出活塞，將供試溶液注入注射器，均勻用力壓活塞，使供試溶液全部通過濾膜，移開活塞前置的過濾裝置，觀察薄膜是否被雜質(zhì)污染，如有雜質(zhì)，重復以上操作。

在預過濾的溶液中加入pH3.5的緩沖劑2ml，加上1.2ml的硫代乙酰胺溶液，混合后靜止10分鐘，再按照上面的方法進行過濾，過濾液先經(jīng)過濾膜再經(jīng)過預濾裝置。均勻壓濾，取出用濾紙干燥。用同樣的方法取規(guī)定量的標準鉛溶液 （1ppmPb），制備一個標準鉛斑。供試溶液的鉛斑顏色不得比標準鉛斑深。

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